四环冻干机—生物制品和生物组织冻干技术（四）

为长期有效保存鼠疫菌种，使其不失原有的生物学特性，郑星铭等早在1997年就进行了鼠疫菌种的冻干研究，给出冻干工艺。活化的菌种接种于溶血赫氏琼脂斜面，28℃培养40h。将培养后的菌种研磨分散于1.5mL灭菌脱脂牛乳中，再分装在10支安甑中，每支约0.2mL、3~4mm高。为确保鼠疫菌种不被抽出，防止污染环境，每支安瓿的管口用灭菌脱脂棉松塞。将安瓿竖立在专用铝盒内，送入已经降温至-30℃的冻干箱内预冻。预冻1h后，继续降温2h后达-55℃。开启真空泵，升华干燥。干燥后加热升温至30℃，维持4～6h。工艺曲线见图5-4。菌种冻干后，放入带有吸湿剂的干燥罐内，抽真空后封口保存。郑星铭的研究报告中强调，冻结温度要低于牛乳的共晶点（-16℃）5～10℃，保证冻实。降温速率为10～15℃/h。第一干燥阶段除去90%以上的水分。第二干燥阶段除去结合水，温度相对要高，但不可高于30℃，以免影响制品的稳定性和活性。

麻疹病毒在液态下不稳定。多年的研究表明，麻疹病毒加入保护剂冻干后，稳定性明显改善。徐斌等通过正交实验研究了麻疹减毒活疫苗的冻干工艺。首先用电阻法测定麻疹减毒活疫苗的共晶点温度为-26℃。设计的正交实验因素水平见表5-7。

注：升华干燥E2过程，制品的温度始终控制在31℃以下。

实验研究中每次分装1800支、0.6mL/支麻疹减毒活疫苗进行冻干实验，然后对冻干制品进行水分、滴度、热稳定性检测，并计算干损率。实验研究的结果表明，优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺参数列于表5-8。以优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺冻干的制品成型良好，干损率平均为1.36%，稳定性好，残余水分在1.62%～1.67%之间。优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺适合麻疹疫苗大规模生产。